Fyrirhuguð notkun: SmitandiBovine Rhinotracheitis veiraAntibody ELISA Detection Kit er notað til aðákvarða smitandi nefslímubólguveirumótefni í sermi nautgripa in vitro.
Sýnishorn: sermi
Efni sem fylgir:
Prófunaraðferðir og túlkun
SKREF 1 Prófunaraðferð
1.1 Undirbúningur fyrir þvottalausn
Working einbeiting wöskuvökvi:Fyrir notkun skal setja þvottalausnina aftur í stofuhita (20-25 gráður) og hrista hana jafnt til að gera hana einsleita. Þynntu síðan 20 sinnum óblandaða þvottalausnina með hreinsuðu vatni (til dæmis er 5ml óblandaðri þvottalausn bætt út í 95ml hreinsað vatn), blandað vel saman og þynnta þvottavökvann má geyma við 2-8 gráður í 7 daga.
1.2 Sýnaundirbúningur
① Heilt dýrablóð var tekið, skilið í skilvindu við 4000 snúninga á mínútu í 10 mínútur og floti var safnað. Einnig er hægt að storkna sermi náttúrulega án blóðlýsu.
② Þynnið sermi sem á að prófa 50 sinnum í sermiþynningarplötunni (til dæmis: bætið 3 ul af sermi sem á að prófa í 147 ul sýnisþynningarefni).
Athugið: Neikvæð og jákvæð viðmiðun þarf ekki að þynna út
1.3 Prófunaraðferð
①Taktu ensímmerkið Microplate (í samræmi við fjölda sýna, hægt að taka í sundur og nota nokkrum sinnum), bætið 100 ul af þynntu sermiinu við ensímmerkið Microplate, stillið tvo brunna hvora fyrir neikvæða stjórn og jákvæða stjórn, og bætið 100 ul við hvarfbrunninn í sömu röð. Hristið sýnið varlega í brunninum, notið þéttiplötufilmuna til að hylja plötuna og ræktið við 37 gráður í 30 mínútur.
②Opnaðu þéttingarplötufilmuna, hristu lausnina af plötubrunninum, bættu 300 µl af þvottavökva í vinnustyrk í hverja brunn og fargaðu síðan vökvanum í brunninn. Endurtaktu skrefin hér að ofan 5 sinnum og klappaðu að lokum þurrt á hreinum gleypið pappír.
③Þynnt ensímsamtenging: Þynntu ensímsamtenginguna (80×) 80 sinnum (til dæmis: 10ul ensímsamtengingarþykkni + 790ul sýnisþynningarefni, tiltekið magn sem þarf er reiknað út í samræmi við fjölda prófunarsýna), blandaðu vel saman og settu til hliðar.
④Bætið 100µl af ensímsamtengingu í hvern brunn, hyljið plötuna og ræktið við 37 gráður í 30 mínútur.
⑤Þvottaensímplata, sértæk aðgerð er sú sama og hér að ofan ②.
⑥Bætið 100µl hvarfefnislausn við hvern brunn, hyljið plötuna og ræktið í 10 mínútur við 37 gráður fjarri ljósi.
SKREF 2 Niðurstöðutúlkun
OD450 gildi hvers brunns var lesið á 96-brunna örplötulesaranum.
2.1 Sannprófun Meðal OD450nm gildi neikvæðrar samanburðar var < 0,25 og meðal OD450nm gildi jákvæðrar samanburðar var Stærra en eða jafnt og 0,6, tilraunaniðurstöðurnar voru gildar. Annars ætti að endurtaka prófið.
2.2 Reikniaðferð
Reiknaðu S/P fyrir hvert sýni sem hér segir með því að nota leiðrétt sýnishorn og viðmiðunargildi:
2.3 Niðurstöðutúlkun
Þegar S/P < 0,2 er það metið sem neikvætt.
Þegar S/P > 0,3 er það metið sem jákvætt.
Þegar 0,2 Minna en eða jafnt og S/P Minna en eða jafnt og 0,3 er það dæmt sem grunsamlegt og mælt er með því að endurtaka sýnatöku og prófa viku síðar.
maq per Qat: elisa uppgötvunarsett fyrir smitandi nautgripabólguveiru, birgjar, framleiðendur, verksmiðju fyrir smitandi nautgripakvefsveiru mótefni elisa.
